人外周血调节性T细胞流式鉴定方法

人外周血调节性T细胞鉴定方法

Treg鉴定方法（胞内）

Tips：以上是通过检测FOXP3鉴定Treg，该方案比较传统，操作相对复杂，目前流行通过CD127来检测人Treg。

Treg鉴定方法（胞膜）

1、取外周血100ml于EP管或流式管中，加入相应的流式抗体（每种抗体5ul），室温避光解育15min；

2．加入1ml红细胞裂解液（1X），室温避光裂解8min，裂解过程中混匀一次；

3、500gmin离心，弃去上清，加入1 ml PBS洗涤一次；

4、500g／min离心，弃去上清，加入0.5 ml PBS重悬细胞，并上机检测分析；

Tips：
CD127是2006年国外发现的一种检测CD4＋CD25＋调节性T细胞的新指标，由于不用破膜所以要比Foxp3方便，CD4⁺CD25⁺纯化的细胞中Foxp3的表达与CD127低表达相关，通过CD4⁺CD127low纯化出的CD4⁺CD25⁺T细胞与Foxp3纯化的CD4⁺ CD25⁺ T细胞数量相似，并且这部分细胞展现了CD4⁺CD25⁺Treg的典型特征，目前认为CD4⁺CD25⁺CD127-/low是较CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺更有价值的特异性检测Treg的分子表面标记。

鉴定结果（胞膜）

说明：
1、直接圈淋巴门，分析CD4⁺CD25⁺ CD127-/low的细胞比例，正常人外周血中Treg细胞在淋巴细胞中占比为3%-7%。
2、需要设置CD4和CD25的单染管，用于调节补偿。